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了解放射性损伤对斑马鱼神经系统的具体影响,有助于评估潜在药物对放射性脑损伤修复的促进作用,为新药开发提供实验依据。
选择健康的野生型或转基因斑马鱼胚胎,将斑马鱼胚胎置于适宜的温度(28.5°C)和培养基中培养至所需的发育阶段(通常为24-72小时后孵化)。斑马鱼照射技术80只成年斑马鱼随机分配到对照组与照射组,将斑马鱼幼鱼置于放射源下,进行一定剂量的照射,剂量采用单次头部20Gy。设置对照组,不进行放射性照射。照射时斑马鱼用0.01%MS⁃222麻醉,利用VARIAN2300EX直线加速器,使用 6MVX线,源皮距100cm。
放射性脑损伤后行为评估:
通过观察斑马鱼的行为变化来评估放射性脑损伤的影响。可以记录斑马鱼的活动能力、社交行为、学习能力和记忆能力的变化。社交偏好测试和迷宫学习测试,以评估斑马鱼在放射性脑损伤后的行为和认知功能变化。计算并比较放射性损伤组和对照组的各行为指标。
Tunel法检测脑组织凋亡细胞制作脑组织石蜡切片,进行Tunnel染色,可评估细胞凋亡情况。
1. 旷场测试(Open Field Test):
使用一个方形或圆形的开放场,尺寸约为20 cm × 20 cm,将斑马鱼放入开放场中央。观察并记录斑马鱼在开放场中的活动,如总活动距离、中心区域活动时间和边缘区域活动时间。使用视频记录设备记录斑马鱼的行为,以便后续分析。
行为指标:
总活动距离:斑马鱼在开放场中的总移动距离。
中心区域活动时间:斑马鱼在旷场中心区域的停留时间。
边缘区域活动时间:斑马鱼在旷场边缘区域的停留时间。
2. 水迷宫测试(Water Maze Test):
使用一个圆形水迷宫,直径约为60 cm,水深约为5 cm。在水迷宫中设置一个目标区域(通常是平台或特定区域)。将斑马鱼放入水迷宫中,记录其找到目标区域的时间。进行多次测试,记录斑马鱼的学习和记忆能力。
行为指标:
找到目标区域的时间:斑马鱼找到目标区域所需的时间。
路径长度:斑马鱼从起点到目标区域的路径长度。
游泳速度:斑马鱼的平均游泳速度。
3. 社交偏好测试(Social Preference Test):
使用一个三室水箱,中间为测试室,两侧分别为社交室和空室。将一只斑马鱼放入测试室,另一只斑马鱼放入社交室,观察并记录斑马鱼在社交室和空室的停留时间。
行为指标:
社交室停留时间:斑马鱼在社交室的停留时间。
空室停留时间:斑马鱼在空室的停留时间。
参考文献:
PraveenKumarMK,Shyama SK,Kashif S,et al. Effects of gamma radiationon the earlydevelopmental stages of Zebrafish (Danio rerio)[J].EcotoxicolEnvironSaf,2017,142:95-101
廖桂祥,龚龙,杨东,等.成年斑马鱼放射性脑损伤模型的建立[J].热带医学杂志,2020,20(08):1009-1012.
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