本文转载自微信公众号：江农研之声，作者江小侬
免疫荧光技术又称荧光抗体技术，该技术主要通过抗原-抗体反应以检测或定位各种抗原，可实现特异标志物的可视化。目前，随着各类期刊要求的不断提高，在免疫荧光实验中，许多期刊都要求提供免疫荧光图片的荧光强度定量图。但在小伙伴们的日常数据处理中，常常只能一张一张地处理图片，这对数据的处理效率大打折扣，接下面将详细介绍免疫荧光图片的批量处理方法，需要的小伙伴们快打开电脑一起学起来吧！
所需软件：ImageJ
软件下载网址：https://imagej.net/software/imagej
前期准备：将所有需要分析的免疫荧光图片放到一个文件夹中，文件夹命名input；再另建一个空的文件夹，命名output。具体步骤如下：
打开ImageJ软件——点击File→Open——导入一张免疫荧光图片
Step.2
点击软件工具栏中的Plugins→Macros→Record
此时会弹出Recorder页面，此页面是用于记录后续图片处理整个流程的代码区，记得处理过程中不要关闭该页面，这是后续实现批量处理的关键！！！
Step.3
点击Image→Type→8-bit（图片变成黑白色）→点击Image→Adjust→Threshold
此时弹出Threshold页面，且可以发现图片中荧光部分被特异识别了出来，在该页面中，可以手动调节阈值以改变其识别荧光区域；但为减小因人为调整阈值而引起的误差，通常会点击左下角的Auto，让软件自动识别荧光区域。
Step.4
点击Analyze→Set Measurements
此时弹出Set Measurements页面，大家可自行选择需要测定的项目。通常，作者会选择Area、Mean gray value、Integrated density、Display label和Limit to threshold，然后点击ok即可。
Step.5
点击Analyze→Measure
此时弹出Results页面，可以发现，刚才在Set Measurements页面所选中的测定项目都已得出相应的结果。此时，一张免疫图片的分析工作就到此结束。
Step.6
复制recorder页面代码→点击Process→Batch→Macro
此时会弹出Batch Process页面，点击input，选中input文件夹，点击output，选中output文件夹；output format中可自行选择输出的文件格式，然后将Recorder页面中的代码复制到Batch Process页面下方的空白区域中，点击process即可。然后，会弹出Results页面，input文件夹中所有荧光图片均已得到相应结果。
Step.7
点击Results页面右上角File→Save as
可对测定结果进行保存，其中Mean即为所需的平均荧光强度。
转自：江农研之声，仅作学术分享使用；侵删
2023年4月1日 | 第2035期
稿件来源 | 食品院研究生分会
作 者 | 张文凯
编 辑 | 翟钰艳 蒋诗音 张啸宇
责任编辑 | 丁晶
审 核 | 谭会乐 席步鑫
终 审 | 黄小珊
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