文/华中农业大学陈昌福，武汉科研时代生物技术有限公司 周鑫军
正文/4226字
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陈昌福有话说
对于由致病性病毒引起的水产养殖动物疾病，至今尚未找到有效的水产用兽药可以有效地治疗。采用注射接种疫苗的免疫预防途径，预防水产养殖动物的病毒性疾病，已经被国内外的试验研究结果证明的确是有效的。但是，迄今为止，还有一些能危害水产养殖动物的致病性病毒，尚未开发出来商品化疫苗。譬如正在危害我国养殖异育银鲫的鲫造血器官坏死症，就尚未研制成功商品化疫苗。
但是，因为异育银鲫属于硬骨鱼类，已经具备了比较完善的免疫系统，试验结果已经证明，可以在多糖类物质的刺激与调节下，将其自身免疫系统的免疫防御功能调节到正常水平后，就可以达到增强养殖鱼类对致病性生物入侵的抵抗能力。
在这个试验中，我们比较了来自酵母和中草药的两种多糖类物质，在相同的试验条件下，投喂添加由两种多糖类物质的饲料一段时间后，证明两种多糖类物质均对养殖异育银鲫具有免疫调节效果。即结果证明了来自酵母菌和来自黄芪的多糖类物质，对异育银鲫均具有较好的免疫调节作用。不过，从来源、质量等稳定性以及经济层面产品性价比的角度考虑，采用来自酵母菌的酿酒酵母细胞壁Ⅱ型的性价比更高一些。
酵母和中草药多糖预防异育银鲫鳃出血病的比较试验结果
摘要：在人工饲养异育银鲫（Carassius auratus gibelio）的饲料中，添加适量的酵母（邦利优，酿酒酵母细胞壁Ⅱ型）和中草药多糖（肝胆康，黄芪多糖），分别制备成含有定量酵母和中草药多糖的饲料投喂养殖异育银鲫。在进入异育银鲫出血病流行时期之前，连续投喂添加有酵母和中草药多糖的饲料28 d，在异育银鲫饲养现场的应用结果证明，能有效地预防养殖异育银鲫由鲤疱疹病毒Ⅱ型（cyprinid herpesvirus Ⅱ，CyHV-Ⅱ）引起的异育银鲫“鳃出血”（鲫造血器官坏死症）的发生。本文比较详细地介绍了采用酵母和中草药多糖预防异育银鲫的鲫造血器官坏死症的情况，并且强调了对养殖鱼类病毒性疾病实施免疫预防的重要性，利用添加酵母和中草药多糖的饲料投喂养殖异育银鲫的程序，对于成功地预防养殖异育银鲫造血器官坏死症等病毒性疾病的重要性。
关键词：酵母多糖；中草药多糖；异育银鲫；免疫调节剂；造血器官坏死症
从2008年开始，我国江苏省盐城地区人工饲养的异育银鲫（Carassius auratus gibelio）暴发性流行一种死亡率极高的“鳃出血”病（图1）。对这种疾病后来的研究结果证明，这是一种由鲤疱疹病毒Ⅱ型（cyprinid herpesvirus Ⅱ，CyHV-Ⅱ）引起的鲫造血器官坏死症（crucian carp hematopoietic necrosis）。
图1示饲养异育银鲫出血病的外观出血症状
这种疾病一旦在饲养异育银鲫中发生，就会导致患病异育银鲫的大量死亡（图2），暂时还没有任何水产用兽药可以有效地治疗饲养异育银鲫造血器官坏死症。能通过免疫预防异育银鲫造血器官坏死症的商品化疫苗，也尚未研制成功。
图3 养殖异育银鲫因造血器官坏死症而大量死亡的情景
异育银鲫属于硬骨鱼类（osteichthyes），已经具备比较完备的免疫系统（immune system）。不仅能对外源抗原性物质在产生特异性免疫应答的过程中产生抗体（antibody），而且对于一些具有免疫调节作用的物质，诸如来自酵母菌的酵母免疫多糖（yeast immune polysaccharide）和来自黄芪（Astragalus membranaceus）等一些中草药中的，如黄芪多糖（astragalus polysaccharides）等多糖类物质，均可以刺激硬骨鱼类产生非特异性免疫反应。即多糖类物质可以通过刺激异育银鲫体内免疫系统以及多种免疫细胞，诱导异育银鲫体内的各种免疫细胞产生各种细胞因子，调节异育银鲫体内免疫系统的免疫防御功能，达到增强异育银鲫抵抗异育银鲫的CyHV-Ⅱ入侵机体的目的。
为了预防CyHV-Ⅱ对养殖异育银鲫的危害，本试验中分别采用来自酵母和中草药的两种多糖类物质，定量添加在异育银鲫的饲料中投喂一段时间后，比较了供试异育银鲫对CyHV-Ⅱ感染的相对免疫保护力（relative percent survival，RPS），现将试验结果报告如下。
1.材料与方法
1.1试验地点及其供试鱼饲养条件
本试验在位于江苏省盐城地区射阳县黄沙港水产养殖区的养殖池塘中进行。于面积约为250.0亩、水深为1.8M，主要饲养异育银鲫养殖池塘内，设置每个规格为4.0m×4.0m×1.5m的网箱30个（图1），作为在本次试验中饲养供试异育银鲫的饲养条件。试验期间每天检测网箱内外水体水质变化状况，每天投喂人工配合饵料，试验期间养殖水体水温变化在（22.5±5.0）℃之间。
图2 设置在养殖池塘内的饲养供试异育银鲫的网箱（4.0m×4.0m×1.5m）
1.2供试异育银鲫与放养数量
1.2供试异育银鲫与放养数量
于每个网箱内，放养经过仔细挑选的游动正常、体表无外伤、体长为（155.0±5.6）g的Ⅱ龄异育银鲫300尾。在正式饲养试验之前，经过预备饲养7d，通过检查供试异育银鲫的状况，剔除体表出现创伤和游动不正常的个体，补充损失的供试异育银鲫数量，并称取每个网箱中供试异育银鲫的总重量。
1.3免疫调节剂及其添加量
本试验中采用来自酵母菌的免疫多糖为邦利优（酿酒酵母细胞壁Ⅱ型），来自中草药的多糖类物质为肝胆康（黄芪多糖），将这两种多糖类物质分别作为对异育银鲫的供试免疫调节剂（immunomodulator）。
在同一个池塘中设置的30个条件相同网箱，将其分别编号为Ⅰ~Ⅵ号网箱为1个试验组。按照鱼体重和投喂饵料量，计算添加邦利优和肝胆康在异育银鲫的饲料中添加量，最终达到异育银鲫分别摄取的邦利优和肝胆康剂量，能分别达到200.0mg/kg.b.w.、300.0mg/kg.b.w.、400.0mg/kg. b.w.、500.0mg/kg. b.w.、600.0mg/kg.和700.0mg/kg. b.w.。每个试验组设置2个重复，2种多糖类物质分别设置2个平行试验组，共用24个网箱。在剩下的6个网箱中，投喂不添加帮利优和肝胆康的异育银鲫饲料，作为对照组网箱。
每天上午8:00、中午13:00和下午16:30各投喂添加有邦利优和肝胆康的饵料1次，投饵量控制为鱼体重的2.5%。连续投喂28d后，检测投喂邦利优和肝胆康试验组异育银鲫，对采用患病异育银鲫同居感染的RPS的变化。
4.从中草药中提取有效成分的主要方法与技术
对供试异育银鲫连续投喂添加有不同含量邦利优和肝胆康的饲料28d结束后，从试验和对照组网箱中随机各捞取50尾供试异育银鲫，称重后将其放养在盛有养殖池水2.5M3的圆形塑料水族箱中，充气饲养。
从周边养殖池塘中收集已经患有鲫造血器官坏死症的异育银鲫，于每个水族箱中放入10尾平均体重150.0g左右，具有典型症状的患病异育银鲫，与水族箱中放养的50尾供试异育银鲫同居饲养6d（期间注意将放入同居感染的患病异育银鲫死亡4~5h后捞出）后，捞除放入的患病异育银鲫处理掉，将供试鱼连续饲养观察21 d。
对在同居攻毒饲养期间死亡的异育银鲫进行解剖检查，判断是否由于感染异育银鲫造血器官坏死症而致死，统计试验组与对照组异育银鲫的死亡率，依下式计算RPS。
免疫保护率（RPS）= [1-（免疫组死亡率/对照组死亡率）]×100
2.结果
对照及试验组异育银鲫在与患有典型鲫造血器官败血症的异育银鲫同居感染攻毒后，各组供试异育银鲫的死亡情况如表1所示。从表1所示数据可以看出，经过投喂邦利优和肝胆康的异育银鲫，均已经获得了一定的RPS，而在饲料中添加邦利优和肝胆康的试验组异育银鲫，其死亡率明显的低于未添加邦利优和肝胆康的对照组。与对照组相比，当邦利优在饲料中的添加量达到400.0 mg/kg.w.，肝胆康在饲料种的添加量达到500.0 mg/kg.w.，供试异育银鲫获得了最高的免RPS。虽然邦利优的RPS稍优于肝胆康，而邦利优与肝胆康两个试验组之间的RPS，则未显示出显著性差别（t测验，P>0.05）。
3.讨论
已经有研究结果证实，养殖异育银鲫容易感染CyHV-Ⅱ的规格是性腺已经发育成熟的鱼体。异育银鲫流行鲫造血器官坏死症的季节，在江苏省盐城地区由两个发病高峰时间段，即每年5月下旬至10月上旬是其主要流行季节。养殖水体水温在15~33℃的范围内都可以发病，最适宜流行该病的养殖水温为22~28℃。异育银鲫造血器官坏死症一旦发生后，导致患病异育银鲫的死亡率很高，对高密度饲养的异育银鲫池危害更为严重，常发生养殖的异育银鲫全军覆没的现象。
异育银鲫造血器官坏死症是由致病性病毒CyHV-Ⅱ引起的，至今尚没有药物可以治疗病毒性疾病。对于广大的水产养殖业者而言，遵循对水产养殖动物疾病的“防重于治”原则是更为重要的。
在预防养殖鱼类病毒性疾病的疫苗尚未研制成功之前，采用能调节养殖鱼类自身免疫系统的免疫防御功能的多糖类物质，通过调节养殖鱼类的免疫防御功能至正常水体，实现提高对病毒性疾病的免于防御功能，是符合我国提倡的对水产养殖动物疾病要做到“防重于治”原则的。
本试验中采用的两种不同来源的多糖类物质，虽然均证明了对养殖异育银鲫具有较好的免疫调节作用。但是，从两种多糖类物质来源、质量的稳定性、以及性价比的角度考虑，建议广大的水产养殖业者在采用多糖类物质预防水产养殖动物疾病时，采用来源、质量相对稳定，性价比更高的酵母来源的多糖类物质（酿酒酵母细胞壁Ⅱ型），从经济效益的角度考虑，可能更加合理一点。
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作者：华中农业大学陈昌福；武汉科研时代生物技术有限公司周鑫军。
编辑：朱洁珊
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