作者 | 吴亮亮 黄伟
单位 | 广东阳春市中医院
PART.01
前 言
乙肝五项检查，又称乙肝两对半，是血液中乙肝病毒血清学标志物。
乙型病毒性肝炎的五项指标：
①乙肝表面抗原（HBsAg）
②乙肝表面抗体（HBsAb）
③乙肝e抗原（HBeAg）
④乙肝e抗体（HBeAb）
⑤乙肝核心抗体（HBcAb）
在临床实践中，乙型肝炎病毒标志物具有多重重要作用。它们不仅有助于诊断感染状况、实时监测疾病进展，还能对慢性乙型肝炎治疗的应答情况进行评估，同时在临床试验中发挥关键作用，以衡量新型抗病毒药物的疗效。因此，乙肝两对半检测结果显得尤为重要。
PART.02
案例经过
在某个阳光明媚的日子，我这位勤勉的检验君正在发光岗位一丝不苟地审核着结果。突然，我发现了一个奇怪的现象：乙肝两对半居然连续N个④、⑤阳性，而①②③却都是阴性。这种情况虽然并非绝对不可能，但其概率恐怕堪比中彩票大奖。
面对这一异常情况，我迅速展开了调查。首先，我对仪器和样本进行了仔细检查，确认仪器无故障，样本血清分离良好且无溶血和黄疸的迹象。但是，我发现仪器上显示的底物液量仅为36,打开仪器查看，发现底物液的数量确实较少。因此，我推测这可能是由于底物液数量较少导致仪器抽吸效果不佳的结果。
为了查明真相，我立即更换了底物液并对仪器进行了清洗。随后，我重新将标本放入仪器进行检测。这一次，检测结果与之前的大相径庭。
最让我放心的是：部分有历史记录的结果与往日相符。为了确保万无一失，我还特意拿了2管没有历史记录的样本，在另外一台设备上进行了检测，结果相差无几。
PART.03
案例分析
为什么缺乏底物液，会导致①②③假阴性，④⑤假阳性？
这要从乙肝两对半的方法学说起。
我院采用化学发光法对乙肝五项进行定量检测，化学发光免疫分析法的原理基于将发光物质或酶标记于抗原或抗体上，使之能特异性地与待测物质相互作用。接着，加入氧化剂、化学发光底物或电压来激发这些物质。
通过氧化剂的作用，发光物质被氧化至激发态；而酶则催化发光底物在电压的激发下转化为高能激发态。由于激发态不稳定，物质会回到基态并以光的形式释放能量。此外，在一定条件下，待测物浓度和发光强度呈线性关系，检测光的强度就可以确定待测物的含量。
乙肝两对半具体的检测原理如下:
①表面抗原(HBsAg):
本产品采用双抗体夹心法原理进行检测。用抗-HBs抗体包被磁微粒，用辣根过氧化物酶标记的抗-HBs抗体制备酶结合物。通过免疫反应形成抗体-抗原-抗体-酶复合物，该复合物催化发光底物发出光子，发光强度与HBsAg含量成正比。
②表面抗体（HBsAb/抗-HBs）:
本产品采用双抗原夹心法原理进行检测。用表面抗原包被磁微粒，用辣根过氧化物酶标记表面抗原制备酶结合物。通过免疫反应形成抗原抗体-酶标抗原复合物， 该复合物催化发光底物发出光子，发光强度与表面抗体的含量成正比。
③乙型肝炎病毒e抗原( HBeAg)：
本产品采用双抗体夹心法原理进行检测。用抗-HBe制备磁微粒，辣根过氧化物酶标记抗-HBe制备酶结合物。通过免疫反应形成抗体-抗原一酶标抗体复合物，该复合物催化发光底物液发出光子，发光强度与HBeAg的含量成正比。
④乙肝e抗体（HBeAb/Anti-HBe）：
本产品采用竞争法原理进行检测。用Anti-HBe和HBeAg包被磁微粒，用辣根过氧化物酶标记Anti- -HBe制备酶结合物。通过免疫反应形成抗体-抗原酶标抗体复合物，该复合物催化发光底物发出光子，发光强度与Anti-HBe的含量成反比。
⑤乙肝核心抗体（HBcAb/抗-HBc）
本产品采用竞争法原理进行检测。用Anti-HBe和HBeAg包被磁微粒，用辣根过氧化物酶标记Anti-HBe制备酶结合物。通过免疫反应形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，该复合物催化发光底物发出光子，发光强度与Anti-HBe的含量成反比。
简单点来说就是在乙肝两对半中：
①②③发光强度与含量成正比，故缺乏底物液，检测到的含量均偏低，结果均阴性。
④⑤发光强度与含量成反比，，故缺乏底物液，检测到的含量均偏高，结果均阳性。
PART.04
知识拓展
HBsAg(乙肝表面抗原）：HBsAg阳性表明患者感染了乙型肝炎病毒(HBV),通常在感染后的1至12周内出现。急性感染者的症状可持续5周至5个月，而如果阳性持续超过6个月，则被视为慢性感染。对于慢性乙型肝炎(CHB)和无症状携带者来说，病情可能持续多年，甚至终身不愈。
HBsAb(乙肝表面抗体）：抗-HBs,一种保护性抗体，其浓度在10 mIU/ml以上，预示着个体已经具备了强大的免疫能力。通过接种疫苗而产生的抗-HBs,对于人群的免疫保护能够持续超过三十年的时间，因此，一般情况下，普通人群无需进行加强针的接种。
HBeAg(乙肝e抗原)：HBeAg,作为HBV病毒复制的关键指标，其在HBV感染后的显现时间稍晚于HBsAg。值得注意的是，HBeAg与HBV DNA之间存在着密切的关联性。一旦此项检测结果呈阳性，意味着病毒复制活动正处于高度活跃状态，且传染性亦较强。
HBeAb(乙肝e抗体）：抗-HBe在HBeAg转阴后出现，预示着HBV的复制活动减弱以及传染性下降。
HBcAb(乙肝核心抗体)：抗-HBc IgM在HBsAg阳性后2~4周出现，为HBV急性感染及慢性感染病情活动的标志。抗-HBc IgG出现较迟，但长期存在甚至终身维持阳性，是现症或既往感染的标志。
本案例中批量出现了①②③阴性，④⑤阳性。
HBsAg（-）
HBsAb（-）
HBeAg（-）
HBeAb（+）
HBcAb（+）
乙肝两对半HBeAb、HBcAb阳性。表明患者为既往感染，处于急性乙型肝炎恢复期，基本无传染性（少数仍有传染性）。
PART.05
案例总结
在本案例中，批量检测结果显示两对半的①②③阴性，④⑤阳性，原因是底物液不足导致的。尽管仪器上的底物液仍显示有36人份的底物液，但其数量有限，导致仪器抽吸效果不佳，从而产生错误的检测结果。
笔者曾向多位发光工程师请教，建议在底物液量剩余20、30或40时进行更换或者让仪器自动切换的均有，无法达成统一意见。在实际工作中，若遇到仪器显示底物液较少的情况，我们必须打开仪器，观察底物液的实际情况，保持高度警觉，以免重蹈覆辙，引发类似的故障。
PART.06
专家点评
广东阳春市中医院检验科主任（副主任技师）：林协
在许多人的心目中，检验科人员的工作仅仅是将样本送入仪器，等待结果呈现即可。然而，实际上，检验人员的职责远不止如此。当面对异常特殊的检验成果时，我们必须具备敏锐的分析能力，深入挖掘问题根源，从而找到解决问题的途径，这样才能发出准确无误的报告。
参考文献
[1]中华医学会肝病学分会基础医学与实验诊断协作组.乙型肝炎病毒标志物临床应用专家共识[J] . 中华肝脏病杂志, 2023, 31(4) : 389-400.
[2]临床医学检验技术核心考点全攻略，程旭，2021.5
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编辑：徐少卿 审校：陈雪礼