培养箱调到 37 ℃，CO₂ 设为 5%，血清也按 protocol 加了 10%。一套操作行云流水，细胞却贴壁稀稀拉拉，长势极慢。
我正对着培养瓶发愁，细胞却先给我打了个一星差评：
四条差评，条条戳心，而这恰好是细胞培养绕不开的四道关：选对细胞系、配对培养基、选好血清、铺好贴壁环境。这四关你能过几关？默克准备了【细胞培养挑战】有奖知识小测，花 1 分钟就能参与，有机会赢取颈枕、手机支架、帆布包、三合一充电线等精美好礼，答案都藏在文章里哦！
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下面我们逐关拆解，看看你的细胞到底卡在了哪一关。
第一关：细胞系选对了吗？
过关干货：如何选中最佳细胞
来源可靠、可追溯：优先选择权威细胞库/保藏中心来源的细胞，来源清晰、信息可追溯。实验室间传来传去的细胞，是错认和交叉污染的重灾区。
身份鉴定（STR 分型）：STR 分型是确认细胞系身份的金标准。张冠李戴是数据不可靠甚至文献撤稿的常见原因，用错了细胞，结果再漂亮也站不住。
支原体检测：支原体污染极其隐蔽，培养基不浑浊、不变色，却会持续拖累细胞状态、干扰实验结果，必须定期检测。
代次合适：传代次数过多，细胞可能发生遗传漂变和表型改变。尽量使用低代次细胞，并及早冻存备份。
复苏状态稳定：复苏后先确认活率与贴壁/增殖状态，状态不稳的细胞先传代恢复，再进入正式实验。
细胞系是实验的「主角」，身份和状态没确认，再好的培养条件也带不动。默克拥有全面的细胞系资源，包括通过与欧洲认证细胞培养物库（ECACC）合作提供的经认证、经验证且无支原体的哺乳动物细胞系和诱导多能干细胞（iPSC）系，以及默克自产的 SCC 系列哺乳动物细胞系等。细胞鉴定方式及结果以具体产品证书或数据页为准；人源细胞系可提供相应 STR 鉴定信息, 让你从起跑线就站稳。
第二关：培养基喂对了吗？
过关干货：选培养基四步法
第一步，看细胞类型：贴壁还是悬浮、原代还是细胞系、什么组织来源，决定基础培养基的大类（DMEM、RPMI-1640、MEM、F-12 等）。
第二步，看糖浓度：DMEM 分低糖（约 1 g/L）和高糖（约 4.5 g/L）。高糖适合代谢旺盛、快速增殖的肿瘤细胞；低糖更适合对糖代谢敏感的研究场景。
第三步，看缓冲体系：常规碳酸氢钠缓冲需要 5% CO₂ 环境配合；短时显微观察或操作时，可在验证后使用 HEPES 辅助稳定 pH；长期无 CO₂ 培养或运输应选用专门设计的培养体系。
第四步，看谷氨酰胺稳定性与丙酮酸钠：普通 L-谷氨酰胺在培养基中易降解并积累氨，可选稳定型二肽形式（GlutaMAX 类添加剂）；丙酮酸钠可作为额外碳源，帮细胞度过应激。
常见细胞系与培养基速配表
注：以上为常见推荐搭配，具体以细胞库随附的培养说明为准。
培养基发黄，不一定是污染
培养基里的酚红是 pH 指示剂：橙红/粉红说明酸碱度正常；发黄说明偏酸——可能只是细胞密度太高、代谢旺盛，当然也可能是细菌污染，需结合培养基是否浑浊、镜检有无杂菌再下结论；发紫红说明偏碱，常见于 CO₂ 供应不足或瓶盖拧得过松。所以看到发黄先别急着扔，镜检及 PCR 检测（排除支原体污染）确认再说。
细胞培养，从选对第一口「饭」开始。贴壁还是悬浮、是否添加 FBS、谷氨酰胺含量，以及液体或粉末剂型，都可按需匹配。Sigma 细胞培养基覆盖 DMEM 高糖/低糖、RPMI、MEM 等多种体系，培养基及盐类成分均经细胞培养应用验证，为细胞提供稳定可靠的营养支持。
第三关：血清加对了吗？
过关干货：选血清重点看什么？
看细胞需求：先确认细胞生长适合的血清类型（FBS、小牛血清、马血清等）和添加比例。例如常见贴壁细胞多用 5%～10% FBS，而某些免疫细胞对血清批次和来源更敏感。常用选型可考虑：F0193 乌拉圭来源胎牛血清、F8318 澳大利亚来源胎牛血清。
看实验目的：干细胞培养、免疫研究或功能实验对血清背景的要求不同。做激素受体、信号通路或转录相关实验时，低血清或无血清/化学成分限定培养基往往能显著降低背景干扰。
看批次稳定性：血清是生物制品，天然存在批次差异，其外观、蛋白含量、生长因子活性均可能波动。对状态敏感的细胞系，建议提前留样备批或进行小规模预测试。更换血清批次或品牌后，可先新旧血清混合过渡 1～2 代，再观察细胞形态、增殖速度和活率。
看处理方式：是否需要热灭活（56 ℃ 30 分钟）应根据实验要求决定。热灭活的主要目的是灭活补体，多数常规培养并不需要，反而可能破坏部分生长因子、析出沉淀，不建议默认处理。除热灭活外，辐照处理也是一种常见选择，适合对病毒和其他外来微生物控制要求更高的培养场景；如有该需求，可选 F8687 澳大利亚来源胎牛血清（γ 辐照）。
看保存操作：血清应按单次用量合理分装，避免反复冻融（一般建议不超过 2～3 次），以减少活性成分降解和污染风险。
细胞吃得好不好，除了基础培养基，还要看血清是否匹配。Sigma 血清产品覆盖多种细胞培养需求，并通过相应质量检测，帮助减少批次波动对细胞状态和实验结果的影响。具体适用范围及检测指标以产品资料为准。
第四关：贴壁环境铺好了吗？
过关干货：常用包被（贴壁因子）体系怎么选
多聚赖氨酸（Poly-L-Lysine）：靠静电作用增强贴壁，通用性好、成本低，神经元、PC12、HEK293 转染实验常用。畅销货号：P4832，P4707
胶原蛋白（Ⅰ 型/Ⅳ 型）：模拟体内基质微环境，适合上皮细胞、内皮细胞、肝细胞等。畅销货号：C3867，C5533
层粘连蛋白（Laminin）：神经细胞、干细胞培养中的「老朋友」。畅销货号：L2020
纤连蛋白（Fibronectin）：可用于成纤维细胞、间充质干细胞的培养。畅销货号：F0895，F2006
包被参数不能马虎
包被浓度、包被时间、温度和包被后的保存条件，都会直接影响贴壁效果：浓度太低、时间太短，可能导致包被不充分；浓度太高、时间太长、温度不适，可能导致细胞形态、活性或者表型发生改变；包被好的板子要避免干燥，按说明书尽快使用或妥善保存。
贴壁不牢，还有这些排查方向
消化过度：胰酶消化时间过长、吹打过猛，会损伤细胞表面的黏附分子。消化后及时终止、轻柔操作。
复苏状态差：冻存复苏后活率低，贴壁就会稀稀拉拉。
支原体污染：隐蔽但持续影响贴壁与增殖，别忘了定期排查。
细胞的「被子」铺好了, 才睡得踏实。Sigma 贴壁因子为细胞打造理想贴附微环境，支持难贴壁细胞培养，可提升细胞健康度与活力，增强生理预测建模可靠性。
细胞培养不是把温度、CO₂ 和血清比例调好就结束了。选对细胞系、配对培养基、铺好贴壁环境，后续实验才能少一点试错，多一点稳定。细胞给你打的差评，你都改了吗？改完就来验收成果：点击下方图片，参与【细胞培养过关挑战】有奖答题，8 道小题测测你能过几关，精美好礼等你来拿！
内容策划：沈佳钰
内容审核：钟可可
题图来源：图虫创意