最近,小编在检测过程当中发现,市面上东风螺的PCR试剂是很少的,因此,一些检测点却用虾的试剂,或者是鱼的试剂来检查东风螺,这一点让小编也感到很无语。这不仅让养殖户花了冤枉钱,还让一些潜在的病害滋生,给养殖带来风险。
今天小编用一些案例,告诉大家一些案例,供大家参考。文末还提供小编整理的东风螺检测建议(包括:如何通过检测,判断东风螺的优劣的技巧,供大家参考。)
一、跨物种混用检测试剂:
1、用虾类EHP试剂盒检测东风螺孢子虫:EHP只感染对虾,无法检出东风螺致病单孢子虫,出现假阴性;
大家可以通过上图可以看出,养殖户送东风螺过来检测虾肝肠孢虫(EHP)?这没有啥意义的,因为虾肝肠孢虫(EHP)是对虾专属微孢子虫,自然易感宿主只有南美白对虾、斑节对虾、罗氏沼虾等虾类,仅寄生虾肝胰腺上皮细胞 。因此,如果想检测东风螺,那么可以选择高发的孢子虫(单孢子虫),它和EHP基因序列完全不同。
2、VNNV试剂盒判定东风螺病害:NNV不侵染螺体,阳性仅代表水体污染,不能诊断螺发病,因此,养殖户想检测东风螺,需要选择东风螺专用试剂盒。
上图,就是有检测点,采用RS来检测东风螺。其实,一点意义都没有。RS全称是RSIV(Red Sea Bream Iridovirus)真鲷虹彩病毒的行业简写,配套荧光PCR试剂盒仅针对海水鱼类专用。他们易感宿主:石斑、金鲳、真鲷、鲈鱼、红鲷等30余种海水硬骨鱼类;特别是引物探针只靶向鱼类RSIV保守基因,仅识别鱼类体内增殖的病毒,所以,拿来筛查东风螺的病害,真的是太不专业了。
3、虾白斑WSSV、EMS、虾虹彩DIV1试剂盒拿去测鱼/东风螺,完全无诊断价值;
4、AbHV病毒试剂盒用来检测鱼虾:仅贝类、东风螺易感,鱼类、对虾不会感染该病毒,结果无意义。所以,该病毒PCR试剂可以用于来排查东风螺的病害。
5、鱼虾螺混养塘检出交叉病原,误判定当前养殖品种患病。比如东风螺检出VNNV核酸,只是滤食富集水体病毒,螺本身不会发病,养殖户盲目消杀造成应激。
二、核酸类型选错(DNA/RNA不分,直接检测失效)
1、DNA病毒用RNA试剂盒,RNA病毒用普通DNA试剂盒
RNA病原:VNNV神经坏死病毒、RV弹状病毒、CMNV偷死病毒,需要反转录RT-PCR试剂盒;普通DNA PCR无法扩增,一律假阴性;
DNA病原:弧菌、WSSV白斑、AbHV疱疹病毒、EHP、虹彩病毒,普通荧光PCR即可,无需反转录;
2.、混用体系:一套试剂同时检测DNA、RNA病原,扩增条件不匹配,Ct值失真、漏检潜伏病原,那么最后,检测就没有意义。
三、病害场景与试剂盒类型选错
1、只买普通定性试剂盒,忽略定量需求:
日常塘口预警、判断感染轻重需要荧光定量qPCR,只能定性的普通终点PCR,只能看有无病原,无法区分高载量爆发风险、低载量潜伏感染。
2、现场流动检测选液体试剂,实验室批量检测用冻干试剂盒:
很多检测点无冷藏条件,却用液体试剂:试剂降解,检测结果失真,有些检测点为了降低成本使用液体试剂,但是保存不当,试剂也非常容易失真;
3、混淆单重、多重试剂盒:
为了节省成本,很多检测点选用多种病原联检直接用多重试剂盒,样本载量过低时发生引物竞争,出现漏检;发病溯源优先单重特异性试剂盒,精准度更高。
四、养殖品种检测优先级错误
1、主次病原颠倒,只查次要条件菌,漏检核心致死病原
东风螺只测柱状黄杆菌、丝囊霉,不测哈维氏弧菌、AbHV;
对虾频繁检测链球菌、气单胞菌,忽视WSSV、EHP、EMS、副溶高致病弧菌;
2、人畜共患病原遗漏:成品不检测霍乱弧菌、创伤弧菌,存在商检扣押风险。
五、剂型、性能忽视带来的检测误差
1、贪图低价选用无特异性引物试剂盒,出现交叉假阳性:
近缘菌种区分不开:比如无法区分副溶弧菌与普通溶藻弧菌,健康塘口误判强致病弧菌超标,盲目用药。
2、忽视试剂盒灵敏度,潜伏期漏检:
普通试剂盒灵敏度低,仅能检出发病中后期高载量病原;苗期预检、潜伏筛查必须选用高灵敏度探针法试剂盒。
3、忽视保存条件差异
冻干型试剂盒误以为可以长期常温存放,但是长期高温存放酶活性衰减;液体探针试剂随意常温运输,核酸扩增失效。
六、配套搭配与实操认知错误
1、只用水体样本检测,不用检测东风螺组织内脏样本:
水体只能反映环境,病原潜伏在肝胰腺、鳃、内脏内,水体阴性不代表养殖生物不带菌,造成漏判;
2、检测时机错误,用药、消毒后采样送检:
有些养殖户在送检的时候,使用消毒剂、抗生素压制病原载量,试剂盒检出假阴性,无法反映塘口真实感染情况;
3、一套试剂盒覆盖全品类养殖,不分鱼虾螺单独配套检测组合,数据参考价值极低。
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