手术室里有手术的无菌操作，很多医生因为这个没少挨骂。那么细胞培养房中的无菌操作，你又知道多少了？一文告诉你，少污染，少挨点师兄师姐的骂。

—— 实验前 ——

1. 进行实验前，打开超净工作台及无菌室紫外灯灭菌 30 分钟。

2. 进入无菌室缓冲间更换工作服，拖鞋，及佩戴好手套、口罩，帽子。

3. 外面物品进入无菌室，需经过传递窗口而不能直接从门口带入，并且打开传递窗口紫外灯灭菌 30 分钟。

4. 枪头、EP 管等耗材需经高温高压灭菌之后才能带入无菌室使用。（枪头、ep 管装好之后用布巾或者报纸包好之后再灭菌，好了之后拿到恒温箱烤干再用。大家记得平时没事，多帮师兄师姐插插枪头哦）

5. 在外面已开包装的未灭菌试剂如自配 PBS、蒸馏水及药物溶液等，在使用前需经过滤器过滤才能使用。（买的未开包装的 PBS 可以直接经过紫外杀菌后使用，自配的亦可高温高压灭菌后使用。注意液体高温高压灭菌，瓶盖不能拧得太紧）

—— 实验中 ——

1. 进行实验时，关闭紫外灯，打开超净台照明灯，及通风按钮，用酒精喷洒双手消毒。（注意下图为进行细胞培养的超净台，如果进行病毒实验，请尽量使用生物安全柜进行操作，并对使用后器物进行分类灭菌处理，不可随意抛弃。)

2. 喷洒酒精双手自然晾干后，点燃酒精灯。（切记等手上酒精干了再点灯，否则容易把自己的手点着，笔者就点着过，多么痛的领悟）

3. 酒精灯处为高温，相对洁净区，所以打开的试剂常放在其周围。

4. 打开的试剂瓶瓶口、离心管管口在使用前需用酒精灯火焰烤一下消毒。

5. 用移液枪吸液时，枪身不可触碰瓶壁，管壁，以免造成污染。

6. 使用移液枪吸液时，一定要缓慢，否则，会产生气泡，导致量不准确，更有甚者，会使液体顺势吸到移液枪上造成污染。

7. 移液枪吸液后，要保持垂直，不可平放或者倒置，经常看到有些新手，吸完液，拿着枪去开瓶盖，液体就流到枪里去了。

8. 废液烧杯的位置为污染区，使用中的枪头触碰到的话，一定要更换。

9. 使用饭盒里灭菌的 EP 管或者冻存管时，用镊子夹取，不可直接上手。

10. 培养皿在往里面加液的时候再打开盖，经常看到有些新手，在没有加液的时候就打开，然后双手在上方摆弄，这样容易造成污染。

11. 怀疑污染的耗材一定要更换，怀疑污染的试剂用过滤器过滤后再使用。

12. 用完试剂后，瓶口及瓶盖重新用酒精灯火焰消毒后，盖上瓶盖，用封口膜封好保存。

13. 实验结束后，要整理好台面，废液及垃圾带出无菌室，超净台用喷洒酒精的纱布擦洗，打开紫外灯。

14. 废液，垃圾分类处理，如有细菌病毒污染的需经灭菌后再抛弃，有毒废液不可随意抛弃，需放到专门废液回收处，等待工人处理。针头，玻璃垃圾要包好后再扔！生活垃圾，科研垃圾一定要分开！

—— 实验室管理 ——

1. 无菌室要定期清洗，消毒。

2. 定期清洗消毒细胞培养箱，更换培养箱中的水。当发现培养箱有异味，或者有人细胞污染时，要及时组织人员清洗消毒。（注意此处的水是高温高压灭菌后的水）

3. 无菌室中恒温水浴锅中的水也需要定期更换。每日检查水浴锅内是否长毛即霉菌。一旦发现，立即清洗消毒更换。（注意此处的水是高温高压灭菌后的水）

4. 工作服定期更换清洗，灭菌。

看似简单的东西，往往是最容易忽略也最容易出问题的地方。人们常说做细胞要想出结果一定要像对待自己的孩子一样细心的照顾自己的细胞。而这关键的一步就是像不让孩子生病一样不让细胞污染，关键在于预防。最后，祝大家细胞培养无污染，结果出来刚刚好！对了，马上开学了，不想浪费口舌的，转给你的师弟师妹看看吧。