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原理、应用、心得全解析
撰文| 邱明慧
在生化分析仪中，生化反应曲线反映了反应混合物的吸光度随着时间或反应进程的变化情况。它可以帮助我们了解反应是否达到平衡、反应速率是否恒定，以及是否存在底物耗尽等问题。
生化反应曲线的主要用途
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结果可靠性判断
通过查看反应曲线，我们可以判断检测结果是否可靠。如果曲线异常，可能意味着试剂、仪器或标本存在问题。
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仪器故障检测
反应曲线可以揭示仪器故障，如试剂针加样不足、冲洗结构的冲洗问题，以及光源灯能量不足等。
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底物耗尽提示
对于速率法项目，反应曲线可以显示底物是否耗尽。如果底物耗尽，需要稀释重测，以确保结果的准确性。
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异常结果分析
当检测结果出现异常时，调出反应曲线可以帮助我们找出问题所在，如试剂有气泡、污染，搅拌棒携带污染等。
如何运用不同的生化反应曲线
本篇以我科的佳能TBAFX8为例，介绍生化分析仪不同项目的反应曲线。要学会看生化分析仪不同项目的反应曲线，可以从以下几个方面进行：
1
了解反应曲线的基础理论
生化反应多遵循朗伯比尔定律或物质的显色原理，生化分析仪器采用光电比色原理，多束垂直单色光束照射比色杯内的有色液体，被测样品吸收光能量后，由光电转换器（如光电管等）将光信号转换成相应的电信号，该信号经过放大、整流并转换成数字信号，送入计算机进行处理。
反应曲线是记录整个生化反应过程的曲线，其纵坐标为吸光度，横坐标为时间或测量周期，吸光度与被测物质的浓度有关。
朗伯比尔定律是描述物质对某一波长光吸收的强弱与吸光物质的浓度及其液层厚度间关系的定律，是分光光度法、比色分析法和光电比色法的定量基础，广泛应用于各种物质的定量分析。
表达式：A=lg(1/T)=Kbc。其中A为吸光度，T为透射比（透光度），是出射光强度（I）比入射光强度（I0），K为摩尔吸光系数（与吸收物质的性质及入射光的波长λ有关），c为吸光物质的浓度（单位为mol/L），b为吸收层厚度（单位为cm，也常用L替换）。
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明确反应类型和检测点
需要知道所检测项目的反应类型（如终点法、速率法），以及反应过程中各个检测点（如试剂加入点、样本加入点、反应开始和结束点等）的对应情况。
生化反应曲线 图源：安图生物
佳能系列仪器首先向反应杯中加入样本（S）、试剂1（R1），并搅拌混匀，约5min后加入试剂2（R2），再次搅拌混匀。在这个过程中，仪器会每隔18秒检测一次吸光度并记录，全程总共得到33个读点数据，所有读点连接成线，就是我们所看到的反应曲线。
终点法
反应混合物经一定时间反应后达到平衡（终点），检测其颜色对光子吸收强度，以此计算待测物的浓度。
终点法生化反应曲线
速率法
在酶反应的最适条件下，用物理、化学或酶促反应的分析方法，在反应速度恒定期（零级反应期）来连续观察和记录一定反应时间内底物或产物的变化，以单位时间酶反应初速度计算出酶活动的大小和代谢物的浓度。
速率法包括两点速率法和多点速率法，主要适用于酶活性和代谢产物的检测。
速率法生化反应曲线
电极法
依据离子选择性电极与参比电极的电位测量原理进行。在电解液中插入离子选择电极（指示电极）作为电池的正极，参比电极作为电池的负极，组成原电池，形成电位差（即电池电动势）。通过测量电池电动势即可测出相应的离子浓度。
透射比浊法
抗原与相应的抗体结合形成的免疫复合物，在反应液中具有一定的浊度，可由一般分光光度法进行透射比浊测定，可用于某些蛋白质和药物浓度等的测定。该法须做多点校准，再经非线性回归，求出抗原或抗体的含量。
各反应类型对应的常用项目
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观察曲线形态
正常的反应曲线通常比较平滑，无明显的跳点。终点法的反应曲线，在反应到达终点或平衡点时，吸光度将不再变化。速率法的反应曲线，吸光度会随时间呈线性变化（两点速率法除外）。
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分析异常曲线
如果反应曲线出现异常，如抖动、斜率异常、吸光度超出范围等，可能是由于样本问题（如溶血、黄疸、脂血等）、试剂问题（如试剂过期、污染等）、仪器问题（如光源不稳定、比色杯脏污等）导致的。此时需要结合其他检测信息（如光电校正、试剂空白、定标时间等）进行综合分析。
脂浊样本，吸光度高
样本浓度高，底物耗尽
试剂瓶有气泡，造成试剂漏加，无法反应
光源不稳定，检测出现跳点
比色杯脏污，曲线特点多为不规则的曲线
图源：安图生物
5
结合临床信息
在审核报告时，要综合考虑整张报告单各个项目的结果，对有疑问或矛盾的项目结果，要查看反应曲线并及时与临床医生沟通，结合病人的情况评估检测报告是否存在偏差。
综上所述，生化反应曲线在生化分析中具有重要意义，它不仅可以帮助我们判断检测结果的可靠性，还可以揭示仪器故障、提示底物耗尽以及分析异常结果的原因。因此，在进行生化分析时，我们应该充分利用生化反应曲线这一重要工具来提高检测结果的准确性和可靠性。
专家点评
钟永妃 阳春市中医院副主任技师
本文剖析了生化反应曲线在临床检验中的应用，内容详实、逻辑清晰，从反应曲线基础理论出发，细致解读了终点法、速率法等不同检测方法的曲线特征，并对异常曲线的识别与分析提供了实用指导。通过图文结合，增强了理论与实践的结合，对实验室人员在结果解读和问题排查中具有较高的参考价值。期待作者能在未来工作中发现更多的异常生化反应曲线供以分享，并进一步探索反应曲线与临床诊断的关联，以丰富该领域的应用深度。
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本文来源丨检验医学网
责任编辑丨舒豪
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