MammaTyper RT-qPCR与IHC检测乳腺癌ER/PR/Ki67/HER2-low之间显示出高度一致性。
目前，尽管多基因检测技术在乳腺癌的诊断和治疗中扮演着越来越重要的角色，但对于这些多基因测试与免疫组织化学（IHC）结果之间相关性的数据仍然相对有限。而深入探索多基因检测结果与IHC结果之间的一致性，对于提高乳腺癌的诊断准确性、优化治疗方案以及改善患者预后具有重要意义。
近期，一项研究致力于评估MammaTyper RT-qPCR与IHC检测在乳腺癌粗针穿刺活检样本中，对雌激素受体（ER）、孕激素受体（PR）、增殖细胞核抗原（Ki67）及人表皮生长因子受体2（HER2）表达的一致性。研究结果显示，MammaTyper检测结果与IHC检测结果呈现出高度一致性，支持了MammaTyper可作为一项可靠且有效的工具，应用于乳腺癌的分类以及HER2低表达肿瘤的识别。这一发现对于病理学家在临床实践中作出精确的乳腺癌诊疗决策，具有重要意义。
研究方法
研究收集了2018至2019年间在伯明翰伊丽莎白女王医院的133个乳腺癌粗针穿刺活检的甲醛固定石蜡包埋（FFPE）样本。样本中侵袭性肿瘤的含量至少为20%，由乳腺病理学家确定。样本的ER、PR、Ki67和HER2状态通过IHC进行评估。使用DAKO Omnis自动染色平台进行ER、PR和Ki67染色，HER2 IHC则使用Ventana BenchMark Ultra平台。Ki67免疫染色切片使用Leica Aperio AT2扫描仪进行扫描，并由病理学家进行评分，同时使用基于深度学习的Ki67评估应用程序（Visiopharm, Denmark）进行数字图像分析。从FFPE样本中提取和纯化RNA，然后使用MammaTyper试剂盒在CFX96 qPCR循环仪上评估ESR1、PGR、ERBB2和MKI67基因的mRNA表达。
计算连续变量的中位数、最小值和最大值，并将分类变量表示为绝对和相对频率。使用正百分比一致性（PPA）、负百分比一致性（NPA）和总体百分比一致性（OPA）以及Cohen's kappa统计量来评估MammaTyper RT-qPCR与IHC检测方法在ER、PR、HER2和Ki67表达判读上的一致性。特别关注HER2低表达肿瘤的分类，并分析Ki67的全局和热点表达。
图1.研究设计流程图
研究结果
临床病理学特征
本研究共纳入了2018至2019年间在单一英国机构（伯明翰伊丽莎白女王医院）诊断的133个乳腺癌粗针穿刺活检样本。患者的中位年龄为61岁（范围：26-92岁），60.3%的肿瘤组织学分级为2级。所有粗针穿刺活检样本均进行了MammaTyper检测。一个包含实体乳头状癌的肿瘤被排除在IHC染色路径之外。
MammaTyper与IHC之间ER、PR、HER2检测的一致性
通过IHC和MammaTyper RT-qPCR检测的ER、PR、Ki67和HER2的截断值已预先分类（例如阳性或阴性）。所有标记的OPA（95% CI）均高于90%；ER为94.7%（89.5%-97.4%），PR为90.1%（83.9%-94.1%），HER2为95.0%（90.0%-97.8%）。
MammaTyper与IHC之间PR检测的一致性
使用1%、10%和20%的截断值，PR/PGR的OPAs超过90%。
MammaTyper与IHC之间HER2检测的一致性
OPA达到95.0%，而PPA相对较低，为84.6%。Kappa值显示为0.759，表明存在实质性的一致性。在126个癌症样本中，有13个（占比10.3%）通过IHC/FISH检测被判读为HER2阳性，而通过MammaTyper检测判读为HER2阳性的样本数量为15个（占比11.9%）。
HER2-low乳腺癌
HER2-low定义为IHC得分为1+或2+且FISH结果为阴性的肿瘤。在113个HER2 IHC阴性肿瘤中，72个（63.7%）为HER2 0，41个（36.3%）为HER2-low。后者通过MammaTyper检测被分类为35个HER2-low，3个HER2阴性和3个阳性类别。总的来说，72个IHC HER2 0肿瘤通过MammaTyper检测被分类为40个HER2-low，31个HER2 0和1个阳性类别（图2）。因此，72个IHC HER2 0肿瘤中有40个通过MammaTyper检测显示出ERBB2低表达（图3）。
图2. HER2 IHC和ERBB2 mRNA类别的河流图
图3. HER2-low分析
ER/PR/HER2 IHC和mRNA表达的分布
ER和PR IHC表现出两个高峰；最高的是强阳性表达，其次是阴性（0）染色。然而，mRNA表现出更广泛的动态范围表达。同样，标准的HER2 IHC得分（0、1+、2+和3+）对应于更广泛的mRNA水平范围，表明IHC得分0、1+和2+可以使用MammaTyper检测进一步分类。
MammaTyper与IHC之间Ki67表达的一致性
Ki67 IHC数据在一个子队列（n=47）中，通过手动及数字分析方式得以获取，鉴于在英国并非所有乳腺癌病例均常规开展此项检测。依据20%的截断值标准，经由标准病理学家的大致评估，MammaTyper所得MKI67与Ki67 IHC的PPA为92.3%，NPA为61.9%。然而，当采用Ki67的热点分析（即数字图像分析）方法时，NPA提升至80.0%，而PPA则略有降低。
研究总结与思考
本研究通过前瞻性研究方法，评估了MammaTyper RT-qPCR与IHC检测在乳腺癌生物标志物（ER、PR、HER2、Ki67）表达评估中的一致性。结果显示，RT-qPCR与IHC在ER、PR和HER2的表达评估上具有高度一致性，其中ER的一致性高达94.7%，PR为90.1%，HER2为95%。特别地，对于HER2低表达的肿瘤，MammaTyper能够识别出更多HER2低表达病例，这可能对治疗决策产生重要影响。此外，MKI67的评估在采用数字图像分析时与IHC显示出更高的一致性。
研究还发现，mRNA表达水平与蛋白水平高度一致，且一致性率高于以往研究。这一发现对于HER2低表达乳腺癌的治疗尤为重要，因为最新的靶向疗法可能对这部分患者有效。例如，德曲妥珠单抗（T-DXd）在HER2低表达转移性乳腺癌患者中显示出相比化疗更优的生存获益。因此，MammaTyper可能成为选择适合抗HER2靶向治疗患者的更可靠工具。
此外，研究还强调了Ki67表达在ER阳性乳腺癌预后中的重要性，并指出IHC评估与基因组检测数据之间存在显著差异。这提示我们，基于mRNA的检测方法可能有助于完善乳腺癌的分子分类和靶向治疗选择。
综上所述，本研究提供了MammaTyper作为IHC在乳腺癌生物标志物评估中可靠替代方法的有力证据，并揭示了其在HER2低表达乳腺癌分类和治疗中的潜在应用价值[2]。这些发现对于病理学实践和乳腺癌患者的个体化治疗具有重要意义。
参考文献：
[1]Badr NM, Zaakouk M, Zhang Q, et al. Concordance between ER, PR, Ki67, and HER2-low expression in breast cancer by MammaTyper RT-qPCR and immunohistochemistry: implications for the practising pathologist. Histopathology. 2024 Sep;85(3):437-450.
[2]Modi S, Jacot W, Yamashita T, et al. Trastuzumab Deruxtecan in Previously Treated HER2-Low Advanced Breast Cancer. N Engl J Med. 2022 Jul 7;387(1):9-20.
审批编号：CN-147517有效期至：2025-11-18
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