引言：受体酪氨酸激酶样孤儿受体1（ROR1）越来越受到关注。勃林格殷格翰和默克公司先后通过收购将ROR1靶向ADC收入囊中，说明了ROR1的重要性及作为ADC靶点的潜力。
图注：ROR1和ROR2相关报道越来越多，关注度持续升高
本文对ROR1靶点的结构和功能进行分析，同时并探讨ROR1 ADC管线。
1、ROR1：结构和表达
受体酪氨酸激酶样孤儿受体1（ROR1）是ROR受体家族成员，该家族包含两种I型跨膜蛋白ROR1和ROR2。ROR家族属于Wnt信号通路，与MuSK（肌肉特异性激酶）和Trk（原肌球蛋白）家族受体密切相关。
ROR1的胞外部分包含一个类免疫球蛋白（Ig）结构、一个卷曲（Fz）结构和一个kringle （Kr）结构域，胞内的结构含有一个假激酶结构域及相关原件。
图注：ROR1的结构示意图
ROR1可以通过介导非经典Wnt通路（尤其是Wnt5a）传递信号，在多种生理过程中发挥重要作用，包括调节细胞分裂、增殖、迁移和趋化性等。
作为Wnt5a的受体，ROR1参与肿瘤细胞NF-κB的激活。如图2所示，Wnt5a 激活受体ROR1或FZD5，导致Dvl2/3的激活和Akt的磷酸化，进而促进 IKKα的磷酸化以激活IKK复合物，IKK复合物负责IκBα降解和NF-κB亚基 p65磷酸化。磷酸化的p65被转移到细胞核以促进靶基因的转录和表达。ROR1/Akt/p65通路的激活进一步促进促炎因子（如 IL-6）和趋化因子（如 CCL2）的分泌。
图注： ROR1/Akt/p65 信号通路
2、ROR1在恶性肿瘤中的作用
ROR1在胚胎发育早期高度表达，参与细胞分裂、增殖和迁移的调节，以及神经、骨骼和血管等器官的生成。随着胎儿的发育，ROR1的表达逐渐降低。在儿童期和成年期，ROR1几乎在正常组织中都很低或不表达。
与正常组织相比，ROR1在多种癌症中高度表达，包括血液系统癌症，如慢性淋巴细胞白血病 （CLL）、套细胞淋巴瘤 （MCL） 和实体瘤（卵巢癌、乳腺癌、前列腺癌、肺癌、黑色素瘤和结直肠癌等）。
图注：ROR1和ROR2在肿瘤组织中的表达和预后情况
在肺癌中，ROR1参与c-Src和MET的激活，导致抑制肿瘤细胞凋亡，并且 ROR1也被发现是cavin-1和caveolin-1的支架蛋白，它们激活肺腺癌中的 AKT。在乳腺癌中，ROR1 促进 PI3K/AKT通路的激活，而ROR1高表达与更严重的疾病进展相关。总之，在许多类型的恶性肿瘤中观察到的ROR1异常表达和相关的促生长信号转导事件使ROR1成为抗癌药物开发的有吸引力的治疗靶点。
3、ROR1的ADC的研究进展
目前，多家公司正在开发针对ROR1的抗癌疗法，包括单克隆抗体、抗体-药物偶联物（ADC）、双特异性抗体、CAR-T疗法，以及其他治疗方式。其中，ADC药物管线进展较快也值得关注。
图注:ROR1 ADC 研发管线
3.1 Zilovertamab vedotin
MK-2140是进展最快的ROR1 ADC之一，此前由VelosBio开发，该公司于2020年11月被默克以27.5亿美元现金收购。
MK-2140 通过蛋白水解可切割的接头mc vc PAB 将靶向ROR1的单克隆抗体UC-961偶联到微管靶向剂Monomethyl auristatin E （MMAE） 上。UC-961是一种人源化抗体，以高亲和力（Kd=2nM）与ROR1的结合，并通过阻断Wnt5a与ROR1的结合对ROR1阳性肿瘤细胞具有直接的细胞毒性活性。
由于UC-961识别的独特表位，抗体在结合时触发ROR1的显着内化，促进毒性载荷特异性递送至ROR1阳性肿瘤细胞。MK-2140已被证明在体外模型中有效诱导细胞周期停滞和凋亡，并在异种移植模型中有效阻断体内肿瘤生长。
图注：MK-2140作用机制
一项开放、单臂 II 期临床试验 （waveLINE-004， NCT05144841） 招募了 40 名至少接受过二线治疗的患者（截至2022.11.16），旨在评估MK-2140（2.5 mg/kg）单药治疗复发或难治性弥漫性大 B 细胞淋巴瘤 （R/R DLBCL） 患者的疗效和安全性。结果显示，MK-2140治疗后，患者ORR为30%（6/20），包括2个CRs和4个PRs。
在血液系统恶性肿瘤的I期研究（NCT03833180）中，MK-2140在晚期套细胞淋巴瘤（MCL）或弥漫性大B细胞淋巴瘤（DLBCL）患者中耐受性良好且有效，MCL组的ORR为47%（7/15），包括3个CR和4个PR，DLBCL组的ORR为80%（4/5），包括2个CR和2个PR。
一项针对实体瘤（包括乳腺癌和肺癌）患者的 2 期研究 （NCT04504916） 目前也在进行中。
3.2 NBE-002
2020年12月11日，勃林格殷格翰宣布以11.8亿欧元（14.3 亿美元，包括临床和监管里程碑付款）收购NBE-Therapeutics的全部股份，采用该公司独特的iADC技术平台和相应的管线。
NBE-002是NBE-Therapeutics靶向ROR1的进展最快的ADC药物，通过分选酶A介导的位点特异性转肽反应，以预定义的药物抗体比（DAR）将人源化抗体（huXBR1-402）与蒽环类药物PNU-159682酶促偶联，从而产生更纯净、更均匀的产品，具有更稳定的生物物理和药代动力学特征。NBE-002不仅具有直接的抗肿瘤活性，而且还增加T细胞对肿瘤的浸润，并将“冷”肿瘤转化为“热”肿瘤，使其对针对PD-1和CTLA-4的检查点抑制剂产生反应。NBE-002目前正处于1/2期临床试验（NCT04441099），以评估晚期实体瘤患者的安全性和耐受性，尤其是三阴性乳腺癌。
图注：NBE-002研发进度
3.3 LCB71 (CS5001)
LCB71由两家韩国公司LegoChem Biosciences和ABL Bio开发。2020年10月，基石药业通过BD获得LCB71在全球韩国以外的开发和商业化权利，预付款为1000万美元，里程碑付款高达3.53亿美元，并收取额外的销售分成。
LCB71（CS5001）是一种由靶向ROR1的人单克隆抗体组成的ADC。这种 ADC 药物经过独特设计，通过称为ConjuALL™ 的位点特异性偶联技术结合独特的β-葡萄糖醛酸连接剂和吡咯苯并二氮卓（PBD）前药。只有在到达肿瘤后，接头和前药才会被切割以释放PBD毒素，从而在癌细胞中产生致命的DNA交联。使用接头加PBD前药可有效帮助解决与传统PBD有效载荷相关的毒性问题，从而获得更好的安全性。
图注：LCB71 （CS5001）结构设计
CS5001目前在美国、澳大利亚和中国大陆进行I期临床试验，初步数据预计将于2023年底前公布。CS5001在Jeko-1（套细胞淋巴瘤）和MDA-MB-231（乳腺癌）异种移植肿瘤模型中以剂量依赖性方式显示出显著的抗肿瘤活性。它是一种很有前途的候选药物，在血液肿瘤和具有高ROR1表达的恶性实体瘤中具有精准治疗潜力。
4、总结
ROR1在各种实体瘤和血液肿瘤细胞中广泛表达，使其成为ADC药物开发的有吸引力的重要靶点。由于独特的位点特异性偶联策略，NBE-002 和 LCB71 都是具有明确DAR的均相ADC，便于生产。
此外，两种ADC中的稳定连接子提供了更好的药代动力学特征。尽管VLS-101的产品并不均一，但一项1期研究已经证明了在MCL和DLBCL患者中的安全性和临床疗效，并且是目前处于2期临床试验中的领先抗ROR1 ADC。无论如何，所有3种抗ROR1 ADC看起来都非常有前途，最近的 3 项重大BD交易可能会促进针对 ROR1 的多种治疗方式的快速开发。