*仅供医学专业人士阅读参考
这个“隐形杀手”不可小觑！
作者：何雪梅
前言
随着科技的发展，检验科人工智能日新月异，检测项目在不断增长中，检验技术和仪器试剂也在不断更新升级中，提高了工作效率和质量的同时，也存在一些风险。一直以来，携带污染问题是影响仪器检测结果准确性的重要风险之一，尤其是全自动生化分析仪，需要检验工作者持续关注并采取有效措施预防。
案例经过
某日，上班时发现两例钙（Ca）特别低的结果：0.73mmol/L、0.69mmol/L。如此低的钙结果，一般首先怀疑标本被EDTA抗凝剂污染情况。是这样吗？按照复检规则，首先对两例标本重新进行检测，结果分别为：2.13mmol/L、2.25mmol/L。
▌两次检测如此大的差异，让检验人员为之一惊，问题在哪？
首先我们对检测系统进行了回顾性分析：当天质控均在控，并分析近三月钙质控，其变异系数符合质量分析目标要求；当天仪器状态良好，且近来无重大故障发生，关键部件都在使用效期内；试剂未更改批号；环境温度变化在允许范围内。我们查看了两管标本性状，黄色清亮无异常；
通过对比两个标本两次检测结果以及反应曲线发现：第一次异常结果均存在异常读点，反应存在干扰，高度怀疑污染所致。
▌可是污染源来自哪里？样本、试剂还是反应杯残留物？
于是我们调取了当天生化仪的所有相关记录信息发现这两个样本其他项目检测结果均正常，同一比色杯前一检测项目并不一致，这就基本排除样本针以及反应杯残留物所致的污染。通过观察该两个样本Ca检测前一个检测项目时间发现，该两个标本Ca检测前一个检测项目均为免疫球蛋白E（IgE），这两个项目试剂位于同一个仓位，共用同一试剂针。
▌难道是试剂携带污染？
案例分析
实验设计
为进一步确认污染源，我们设计了交叉污染试验：选择一份正常的血清，在全自动生化分析仪正常相同运行情况下，单独进行检测Ca 10次，检测结果设置为对比组；接着选择将该血清分成两份，一份进行检测IgE，另一份紧随其后检测Ca（IgE、Ca、IgE、Ca、IgE、Ca、……），如此重复10次，检测结果设置为研究组，两组计算出均值，均值进行比较，偏倚（∣对比组-研究组∣/对比组）>1/2TEa为携带污染，根据WS/T 403-2012 《临床生物化学检验常规项目分析质量指标》Ca的TEa为5%。
表1 交叉污染试验
注：Ca检测结果单位为mmol/L
由表1可知，对比组与研究组的均值偏倚为26.64%，远远大于2.5%，结果差异显著，提示IgE试剂对Ca检测的携带污染。
接着我们进一步设计了干扰分析试验：取一正常混合血清，单独检测Ca，原始结果为2.45mmol/L；接着取100μL血清，分别取1μL、2μL、3μL、4μL、5μL、6μL、7μL、8μL、9μL、16μL IgE试剂1与血清充分混合均匀后作为试验的样本，进行Ca检测；IgE试剂2同样进行同试剂1的操作；检测结果与原始结果进行比较，偏倚（∣原始结果-试验结果∣/原始结果）>2.5%则提示干扰存在。
表2 试剂干扰检测表
注：试剂量单位为μL，Ca结果单位为mmol/L
由表2和试剂干扰图可知，随着IgE试剂量的增加，偏倚基本上越大，结果差异越大，干扰越明显，且试剂1干扰明显大于试剂2。
解决措施及效果验证
为确保近来Ca检测结果的准确性，我们对近期临床样本进行了回顾性分析，无异常发现。为解决该携带污染问题，我们参考了《生化分析仪携带污染的分析评估及处理方法专家共识》，设置了避免交叉污染程序（特殊冲洗），主要表现为在加入IgE试剂1以及试剂2后采用实验室纯水进行清洁试剂针，按交叉污染试验方案：在全自动生化分析仪正常相同运行情况下，取一混合血清，先单独检测Ca，重复10次，结果为对比组；再按IgE、Ca、IgE、Ca、IgE、Ca、……顺序，如此重复10次，结果为解决组；两组均值进行比较，偏倚（∣对比组-解决组∣/对比组）<1/3TEa则提示IgE试剂对Ca检测携带污染问题得以解决。
表3 解决方案试验
注：Ca结果单位为mmol/L
由表3可知，在设置特殊冲洗后，IgE试剂对Ca检测结果均值与对比组比较，偏倚为0.46%<1.67%，结果差异在允许偏倚范围内。因此设置特殊冲洗程序可以有效解决该携带污染问题。
与此同时，我们对临床样本进行了跟踪验证：选取钙浓度覆盖低、中、高的5个临床标本，单独检测Ca，结果设为比对组；然后采用一混合血清先检测IgE，紧随其后检测一个临床样本中Ca，如此检测该5个临床样本，结果设为实验组；计算每个标本结果差异，偏倚（∣比对组-实验组∣/比对组）<1/3TEa（1.67%）则认为两组检测结果无显著偏差，其中5个样本均符合要求则认为比对通过。
表4 临床样本效果验证
由表4可知，5个样本结果差异均在允许偏差范围内，提示IgE试剂对Ca检测携带污染问题得以有效解决。
总结
全自动生化分析系统携带污染是指前一个生化测试过程中残留的物质（生物样品、试剂、混合反应液或反应产物等）通过仪器元件（探针、比色杯、搅拌棒、管理等）被携带到下一个生化检测反应中，参与反应、影响反应进程、直接或间接干扰比色或比浊等，并导致检测结果显著偏差的过程。
试剂携带污染是全自动生化系统携带污染中的一种，主要见于以下两种情况：
1、残留试剂直接由试剂探针携带进入下一个反应体系中；
2、反应混合液有搅拌棒或比色杯携带入下一个反应。
试剂携带污染最典型的特点为：通常“配对”发生，即某一特定检测的试剂或其他化学残留被携带入紧随其后的另一个特定检测项目反应体系中。本案例属第1种情况，特点明显，其原因可能为：
1、IgE试剂影响反应体系的酸碱度，直接干扰了Ca比色检测；
2、IgE试剂与Ca发生了反应；
由于对试剂成分缺乏具体详细认识，其影响原因有待进一步研究确认。
临床实验室生化项目众多，标本成百上千，标本及项目检测排序无固定规律，使用试剂及其反应原理各不相同，因此全自动生化分析仪相较其他仪器更容易发生污染情况，且往往隐匿性发生。
携带污染具有以下特点：
1、在日常工作中不易通过室内质控及常规的性能验证发现；
2、携带污染发生的频次随着项目数、检测量的增加而增加；
3、携带污染的发生频次、严重程度与仪器状态、使用时间长短和项目排布顺序等直接相关。
因此，在我们的日常工作中，应注意识别隐匿的携带污染，同时更应有目的、有计划的对携带污染进行评估和有效预防。为减少携带污染带来的结果偏差和对患者诊疗的影响，笔者认为实验室应：
1、增加携带污染评估频次，如定期评估、必要时评估（新增检测项目时评估）等；
2、不断优化试剂/项目设置；
3、加强仪器设备维护保养，必要时增加仪器维护频次；
4、必要时设置特殊冲洗程序。
参考文献：
[1].邱玲,王培昌等。生化分析仪携带污染的分析评估及处理方法专家共识[J].中华检验医学杂志，2020,43（07）：712-717.
[2].柯培峰,刘冬冬,徐建华等。全自动生化分析仪携带污染的发现及其解决方案[J],广东医学，2014,35（11）:1728-1731.
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本文来源：检验医学网
责任编辑：舒豪
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