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筛选阳性杂交瘤细胞的方法有很多，常用的有：免疫荧光技术、ELISA 法、流式细胞术、免疫组化检测法。
丁香实验邀请有 3 年以上筛选阳性杂交瘤细胞经验的硕博实验高手，从实验步骤到常见问题，带你手把手完善实验。
（本专题合作专家）
01、免疫荧光技术：是指将抗原抗体反应和荧光标记技术联合使用以鉴定阳性杂交瘤细胞株的方法。以下实验 protocol 经过多年验证，亲测有效：
02、ELISA 法：是一种免疫测定技术，利用抗原抗体结合的手段，实现细胞或组织内生物活性物质的检测和定量。
03、流式细胞仪：基于对荧光标记抗原与抗体亚型结合免疫球蛋白作为筛选指标，能够全自动、快速、高效地对针对杂交瘤细胞进行筛选。
04、免疫组化：是以免疫学的抗原-抗体反应为理论基础，使用标记的特异性抗体，在细胞组织中检测和定位抗原（例如蛋白质）的技术。
这种方法利用了抗体与抗原之间的特异性结合。在阳性杂交瘤的筛选中，IHC 可以用来确定杂交瘤细胞是否产生了目标抗体。
「进阶」
IHC 法常见问题
在实际操作过程中，以上 4 类方法也会涉及注意事项，与异常结果。以上 4 个 protocol 整理了常见问题与经验，我们以 IHC 法为案例看看异常结果如何分析与处理：
Q：出现背景过高？
A：这可能是由于非特异性的抗体结合，或者检测步骤过敏感。可能的解决方案包括优化阻断步骤，调整抗体的稀释，或者减少检测步骤的敏感性。
Q：信号过弱或无信号？
这可能是由于抗原的丰度过低，或者抗体的质量或稀释不适当。可能的解决方案包括优化抗原修复步骤，使用更高质量的抗体，或者增加抗体的浓度。
Q：信号不均匀？
这可能是由于切片的处理不均匀，或者抗体的孵育不均匀。可能的解决方案包括改进切片的处理和存储条件，或者确保抗体在孵育过程中能够均匀覆盖切片。
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