实验室导师巡逻时间，我假装在看文献，其实在排队等做 PCR。
导师
怎么在看文献，今天安排了啥实验？
今天还是准备扩增目的基因，PCR 仪一直有人在用，没轮得上我。
师弟
导师
实验室三台，都在有人用吗？
我上次扩出来条带的那台一直有人用，其它两台和我不搭，我有强迫症。
师弟
导师
别整那些玄乎的，相信科学！你还是基本功不扎实，回头多请教师姐，看看有哪些细节没注意好。
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「幸运仪器」是真实存在的吗？实验室有时候会有一些「传说」，怎么都扩不出的条带，用某台 PCR 仪就能行。那么，你在选择 PCR 仪时更关注哪些特点？欢迎识别下方二维码或者点击「阅读原文」参与本次 PCR 调研，完成简单问卷即可参与抽奖赢取小熊养生壶、膳魔师保温杯、充电宝等多重好礼，千万别错过哦～
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PCR 玄学并不可靠！与其苦等某一台仪器，不如把实验整个弄通来得实在。针对师弟的 PCR 问题，我们也整理了一份实验中的注意点，帮助大家告别玄学：
情况一：未出现目的条带时
问题点：试剂不合格、PCR 仪有故障
解决方式：在两台不同的 PCR 仪上用新鲜购买的试剂与老的试剂分别进行 PCR，比较其扩增产物结果。如是 PCR 仪问题，及时保修并在仪器醒目位置贴故障标识。
问题点：复性条件或扩增程序设置错误
解决方式：重新计算引物 Tm 值，并核对体系、程序是否设置合理；设置梯度退火温度，优化程序。如果以上均解决无误，问题应在引物上，重新设计合成新的引物。
情况二：条带与预计的大小不一致或者非特异性扩增带
问题点：模板或引物浓度过高、酶用量过高
解决方式：适当减少用量再次实验
问题点：程序设计问题，可能存在退火温度偏低、循环次数过多的情况
解决方式：优化程序，再次实验。如果以上均解决无误，问题可能由引物特异性差导致，重新设计合成新的引物。
情况三：条带有拖尾，凝胶图片模糊
问题点：模板可能被降解或者纯度不够
解决方式：重新纯化模板，并再次进行实验。
问题点：程序设定有误，退火温度偏低或循环次数过多
解决方式：优化程序，提高退火温度、减少循环次数。
问题点：dNTP、Mg2+浓度偏高
解决方式：适当降低 dNTP 和镁离子的浓度。
PCR 实验虽然基础，但细节满满不能马虎。每次问题的出现，都需要对每个环节进行全方位的检查。PCR 仪作为其中的重要工具，承担了最为重要的责任，我们希望能够了解您在实验中对仪器选择的关注点，以便为科研工作人提供更好的服务和帮助。点击文末「阅读原文」参与 PCR 调研，更多丰富礼品等你来拿！
内容策划：王丹琦
内容审核：吴军
题图来源：丁香园论坛