来源：检验视界网
新型冠状病毒
核酸快速检测仪器选择与性能验证
摘要：自2020年新冠疫情爆发以来，给分子室以极大的挑战，传统实时荧光定量PCR技术目前是临床上新型冠状病毒肺炎主要的确诊方法，但传统PCR扩增法，由于其专业实验室分区的场地限制、所依赖技术程度高、需提取DNA、检测步骤多、需PCR仪、检测耗时长等特点，使得无法突破日渐增多的门急诊快速检测需求。
01
前言
自2020年新冠疫情爆发以来，给分子室以极大的挑战，传统实时荧光定量PCR技术目前是临床上新型冠状病毒肺炎主要的确诊方法，但传统PCR扩增法，由于其专业实验室分区的场地限制、所依赖技术程度高、需提取DNA、检测步骤多、需PCR仪、检测耗时长等特点，使得无法突破日渐增多的门急诊快速检测需求。
等温扩增技术相较于荧光定量PCR技术，在保证了较高的灵敏性和特异性的同时，缩短了检测时间，其仪器设备体积小而轻便，适用于快速检测，此技术由于一次开盖，封闭检测降低了对场地及专业人员的依赖，大大缓解了急诊的压力。
02
快检仪器的特点及系统的选择
等温扩增技术虽具有极高的灵敏度和特异性，但缺点在于引物复杂、假阳性率高。故在选择快检检测系统时应有较全面、系统的评估。
快检仪器的选择原则
1.1仪器产品需符合国家或本地相关法律、法规及政策标准。如为国外仪器，需经FDA等权威机构认证和授权机构的质量测试；如为国产仪器，需选择经国家食品药品监督管理局的认证和测试。三证齐全，即生产企业许可证、产品经营许可证、医疗器械注册证或产品合格证。
1.2遵循循证医学要求，明确选择快检仪器应从病人需求的角度出发，结合临床急门诊对于特殊人群亟待缩短核酸报告时间为前提，快速检测仅反应患者某一时间点的生理或病理状态，应从疾病诊断的实际需求出发申请检测，做到有的放矢，避免滥用和过度的医疗。
1.3结合各厂家市场占有率，综合考虑厂商的服务水平与能力进行选择。
1.4应满足但不限于以下6个需求
1.4.1快: 检测时间应在60min以内，满足急门诊随来随检的需求；
1.4.2准：核酸快速检测也应满足准确性、重复性好的临床要求；
1.4.3易：仪器设备应简单易于操作、检测步骤应尽可能的少、标准化程度较高、专业技术依赖程度低；
1.4.4安：一次性开盖，封闭检测，最大化降低污染的风险；
1.4.5小：检测设备小巧、轻便；
1.4.6廉：成本合适、减轻患者的经济负担。
1.5明确仪器设备所需环境、摆放条件、电气要求、仪器消毒所需消毒剂、仪器设备维修所需空间场地、仪器日常维护的难易程度等等是否符合本实验室的实际情况。
1.6充分了解仪器设备可能会对实验工作人员健康或实验环境造成的影响
试剂的选择
应选择与检测系统相配套的检测试剂，最好选用同一个厂家的，如仪器没有配套检测试剂或实验室更换试剂厂家时应根据仪器设备厂家的要求，选择推荐或相匹配的试剂并应做性能验证实验。
采样管的选择
应选择与检测系统相配套的采样管或仪器设备厂家推荐的，需满足但不限于以下要求：采样管的材质应符合相应的政策标准、采样管及拭子的材质没有已知的核酸检测抑制物，密封性好有一定的防漏能力，管身耐压，含有胍盐或其他有效灭活病毒的保存液，保存液应具便于识别的颜色、且具有一定消化粘液的能力，螺纹瓶口便于开盖、折断点设计合理易于折断等。
03
快检仪器的性能验证
实验前准备
在进行性能验证前还需进行仪器设备的校准，仪器设备的校准需有资质的厂家工程师进行，至少应对仪器的外观、温度、荧光强度、荧光染料进行校准。校准时需要实验室工作人员和厂家工程师一起进行。有条件时还应与厂家工程师沟通，共同制定校准的SOP，规定校准的周期并严格按照执行。
性能验证时机
2.1新的检测系统常规应用前
2.2现有检测系统关键要素改变后，例如：仪器软件更新、试剂盒升级、温度或荧光强度进行校准后等
2.3当仪器搬迁、故障维修后、设施或环境严重失控后
性能验证方案
3.1准确性
3.1.1方案：选择已知阴性结果的临床样本10例；第三方有资质的阳性质控品10例，选择浓度应为厂家声明其最低检测下限的1.5-3倍，进行实验。
3.1.2可接受标准：阳性符合率=a/（a+c）x100% ，应≥95%
阴性符合率=d/（b+d）x100% ，应≥95%
3.2精密度
3.2.1方案：选择已知阴性结果的临床样本10例；第三方有资质的阳性质控品选择浓度应为强阳性浓度，将强阳性质控品按2-3倍梯度稀释至厂家声明其最低检测下限以下，每个浓度重复测定10次。
3.2.2可接受标准：阴阳性需100%符合，且阳性标本重复检测的CT值应＜5%
3.3检测限
3.3.1方案：第三方有资质的强阳性质控品按2-3倍梯度稀释至厂家声明其最低检测下限以下，每个浓度重复测定10次。
3.3.2可接受标准：≥95%最低检测下限浓度以上的样本结果为阳性。
3.4采样管的适配灵敏度验证
3.4.1取待验证采样管模拟采样（将拭子放入采样管内充分混匀），取混匀的保存液将强阳性质控品按2-3倍梯度稀释至厂家声明其最低检测下限以下，每个浓度重复测定10次。
3.4.2可接受标准：阴阳性需100%符合
3.5其他：除准确度、精密度、检测限等性能验证指标外，试剂厂商还会提供交叉反应和干扰物等其他性能指标，实验室可根据自身的实际情况进行验证实验。这里提供交叉反应及抗干扰能力的验证方案供选择
3.5.1交叉反应：实验室可根据与新冠病毒核酸具有同源性、易引起相同或相似临床症状的病原体核酸进行验证，也可根据试剂厂商声明的无交叉反应的病原体进行验证实验
3.5.1.1方案：取一定浓度与待测核酸可能存在交叉反应的病原体加入标本保存液内，与常规标本同样处理，重复至少3次。
3.5.1.2可接受标准：检测结果应为阴性。
3.5.2抗干扰能力：实验室可根据说明书中涉及的干扰物质进行实验，或应用常见的干扰物进行实验，例如：血红蛋白、胆红素、类风湿因子等。
3.5.2.1方案：在弱阳性质控品中加入干扰物质（对照组加入等量的溶剂），使得干扰物浓度与厂家声明的浓度一样，与常规标本同样处理，重复至少3次。
3.5.2.2可接受标准：阴性标本为阴性，弱阳性标本为弱阳性。
04
质量保证
1. 快检仪器应定期与常规方法进行比对，周期可根据仪器使用率及标本量确定合理的比对时间。可选取20例标本，分别包括阴性的临床标本、阳性的第三方质控品、弱阳性质控品，进行重复实验，检测结果阴阳性须100%符合。
2. 如实验室内有多台快速检测仪器则每台均需定期做性能验证实验，各台仪器之间还应定期进行比对，保证检测结果的一致性。
3. 如实验室内有多名工作人员，还应定期做人员比对，可选取5例标本，分别包括阴性的临床标本、阳性的第三方质控品、弱阳性质控品，对每位核酸检测人员进行比对实验，检测结果阴阳性须100%符合。
4. 快检仪器也须定期参见省和（或）卫生部临检中心室间质评活动，保证结果的准确性，及时发现问题。
5. 每台快检仪器均应定期进行室内质控。周期可根据仪器使用率及标本量制定合理的质控时间，当仪器进行性能验证后、试剂厂家更换后、环境设施严重失控后应及时做阴性和弱阳性室内质控；当仪器性能分析稳定时，可对各个检测通道逐孔顺延进行质控，保证在一个周期内进行全部通道的质控工作。